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一種利用黃岑根轉化合成熊果苷的方法

文檔序號:10679782閱讀:520來源:國知局
一種利用黃岑根轉化合成熊果苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用黃岑根轉化合成熊果苷的方法,屬于熊果苷合成技術領域。本發(fā)明通過自制組織培養(yǎng)液培養(yǎng)黃岑根,加入氯化鈣和失水山梨醇脂肪酸酯增加黃岑根的細胞通透性,增加對苯二酚通過率,促進黃岑根對熊果苷的合成,再乙醇提取結晶,干燥制得熊果苷。本發(fā)明生產(chǎn)周期短,分離純化容易,選擇性好,充分利用培養(yǎng)液中添加氯化鈣和表面活性劑提高組織細胞通透率,增加熊果酸的產(chǎn)量,針對性強,所得產(chǎn)物生物利用度高達99.6%以上,產(chǎn)量提高了30.2~32.5%。
【專利說明】
一種利用黃岑根轉化合成熊果苷的方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及一種利用黃岑根轉化合成熊果苷的方法,屬于熊果苷合成技術領域。 【背景技術】
[0002]熊果苷又名熊果素,呈白色針狀結晶或粉末。萃取自熊果的葉子,能夠通過抑制體內酪氨酸酶的活性,阻止黑色素的生成,從而減少皮膚色素沉積,祛除色斑和雀斑,同時還有殺菌、消炎的作用。主要用于高級化妝品的制備。熊果苷是源于綠色植物的天然活性物質,集“綠色植物、安全可靠”和“高效脫色”三者合諧統(tǒng)一于一體的皮膚脫色組份,它能迅速滲入肌膚,在不影響細胞增殖濃度的同時,能有效地抑制皮膚中的酪氨酸酶的活性,阻斷黑色素的形成,通過自身與酪氨酶直接結合,加速黑色素的分解與排泄,從而減少皮膚色素沉積,祛除色斑和雀斑,而且對黑色素細胞不產(chǎn)生毒害性、刺激性、致敏性等副作用,同時還有殺菌、消炎的作用。它是當今流行的最為安全有效的美白原料,也是二十一世紀的理想皮膚美白祛斑活性劑。目前熊果苷合成方法有化學合成法、酶合成法和生物轉化法,應用最廣泛的是生物轉化法,它利用生物體中酶體系將原料高效地轉化為目標產(chǎn)物。該法所用原料潔凈,轉化率高,生產(chǎn)無污染,但生產(chǎn)周期長,分離純化復雜,可利用酶系有限,選擇性差,且所得產(chǎn)物生物利用度低,產(chǎn)量低。
【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題:針對生物轉化法合成熊果酸生產(chǎn)周期長,分離純化復雜,可利用酶系有限,選擇性差,且所得產(chǎn)物生物利用度低,產(chǎn)量低的弊端,提供了一種通過自制組織培養(yǎng)液培養(yǎng)黃岑根,加入氯化鈣和失水山梨醇脂肪酸酯增加黃岑根的細胞通透性,增加對苯二酚通過率,促進黃岑根對熊果苷的合成,再乙醇提取結晶,干燥制得熊果苷的方法。本發(fā)明通過向培養(yǎng)液中添加氯化鈣和表面活性劑提高組織細胞通透率,提高了黃岑根對對苯二酚的利用度,增加熊果酸的產(chǎn)量,解決了傳統(tǒng)生物轉化法合成熊果酸生產(chǎn)周期長,分離純化復雜,可利用酶系有限,且生物利用度低、產(chǎn)量低的問題。
[0004]為解決上述技術問題,本發(fā)明采用如下所述的技術方案是:(1)按重量份數(shù)計,稱取90?95份硝酸鉀、8?9份磷酸二氫鉀、1?2份乙二胺四乙酸二鈉、0.1?0.3份硼酸、0.1?0.2份甘氨酸、0.3?0.5份硫酸鋅、10?20份肌醇、40?50份水解乳蛋白、10?15份葡萄糖、50?55份蔗糖及800?900份蒸餾水,攪拌混合均勻,得自制黃岑根組織培養(yǎng)液;(2)量取400?500mL上述自制黃岑組織培養(yǎng)液裝入錐形瓶中,再移入無菌箱中,向錐形瓶中接種4?5g鮮嫩的黃岑毛狀根,用黑布遮住無菌箱在黑暗環(huán)境中于27?29°C下培養(yǎng)18 ?22天;(3)培養(yǎng)結束后分別向錐形瓶中加入10?20mL質量濃度為5%氯化鈣溶液和3?5mL失水山梨醇脂肪酸酯,放置在搖床上振蕩混合過夜,再向其中加入1?2mL質量濃度為10%對苯二酚溶液,繼續(xù)保溫轉化30?35h;(4)取出轉化后黃岑毛狀根,并用去離子水沖洗20?30min后,放入氣流粉碎機中粉碎, 過60目標準篩,得黃岑根碎塊,將黃岑根碎塊移入超聲提取儀中,同時向其中加入黃岑根碎塊總體積3?5倍質量濃度為60%乙醇溶液,以300?400W功率超聲振蕩提取3?5h后,過0.4 ?0.5mi微孔濾膜,得純化提取液;(5)將上述純化提取液裝入旋轉蒸發(fā)器中,旋蒸濃縮至其原體積的1/5后,向其加入0.1 ?〇.3g熊果苷晶種,攪拌均勻后放入4?6°C冰水浴中靜置結晶過夜,過濾得析出的熊果苷晶體,將其放入真空干燥機中,在0.05?0.07MPa的真空度和60?70°C條件下干燥1?2h,即得熊果苷。
[0005]本發(fā)明的應用方法:將本發(fā)明制得的熊果苷添加至祛斑霜原料中,添加量為祛斑霜原料總質量3.5?4.0%,制得祛斑霜,該熊果苷生物利用度高達99.6%以上,可有效抑制體內酪氨酸酶的活性,阻止黑色素的生成,與傳統(tǒng)的生物轉化法相比熊果苷產(chǎn)量提高了30.2 ?32.5%,生產(chǎn)周期縮短了7?9天。
[0006]本發(fā)明與其他方法相比,有益技術效果是:(1)本發(fā)明生產(chǎn)周期短,分離純化容易,選擇性好;(2)充分利用培養(yǎng)液中添加氯化鈣和表面活性劑提高組織細胞通透率,增加熊果酸的產(chǎn)量,針對性強;(3)所得產(chǎn)物生物利用度高達99.6%以上,產(chǎn)量提高了30.2?32.5%?!揪唧w實施方式】
[0007]首先按重量份數(shù)計,稱取90?95份硝酸鉀、8?9份磷酸二氫鉀、1?2份乙二胺四乙酸二鈉、〇.1?〇.3份硼酸、0.1?0.2份甘氨酸、0.3?0.5份硫酸鋅、10?20份肌醇、40?50份水解乳蛋白、10?15份葡萄糖、50?55份蔗糖及800?900份蒸餾水,攪拌混合均勻,得自制黃岑根組織培養(yǎng)液;然后量取400?500mL上述自制黃岑組織培養(yǎng)液裝入錐形瓶中,再移入無菌箱中,向錐形瓶中接種4?5g鮮嫩的黃岑毛狀根,用黑布遮住無菌箱在黑暗環(huán)境中于27 ?29°C下培養(yǎng)18?22天;在培養(yǎng)結束后分別向錐形瓶中加入10?20mL質量濃度為5%氯化鈣溶液和3?5mL失水山梨醇脂肪酸酯,放置在搖床上振蕩混合過夜,再向其中加入1?2mL質量濃度為10%對苯二酚溶液,繼續(xù)保溫轉化30?35h;取出轉化后黃岑毛狀根,并用去離子水沖洗20?30min后,放入氣流粉碎機中粉碎,過60目標準篩,得黃岑根碎塊,將黃岑根碎塊移入超聲提取儀中,同時向其中加入黃岑根碎塊總體積3?5倍質量濃度為60%乙醇溶液,以 300?400W功率超聲振蕩提取3?5h后,過0.4?0.5mi微孔濾膜,得純化提取液;最后將上述純化提取液裝入旋轉蒸發(fā)器中,旋蒸濃縮至其原體積的1/5后,向其加入0.1?0.3g熊果苷晶種,攪拌均勻后放入4?6°C冰水浴中靜置結晶過夜,過濾得析出的熊果苷晶體,將其放入真空干燥機中,在0.05?0.07MPa的真空度和60?70°C條件下干燥1?2h,即得熊果苷。
[0008]實例 1首先按重量份數(shù)計,稱取90份硝酸鉀、8份磷酸二氫鉀、1份乙二胺四乙酸二鈉、0.1份硼酸、〇.1份甘氨酸、〇.3份硫酸鋅、10份肌醇、40份水解乳蛋白、10份葡萄糖、50份蔗糖及800份蒸餾水,攪拌混合均勻,得自制黃岑根組織培養(yǎng)液;然后量取400mL上述自制黃岑組織培養(yǎng)液裝入錐形瓶中,再移入無菌箱中,向錐形瓶中接種4g鮮嫩的黃岑毛狀根,用黑布遮住無菌箱在黑暗環(huán)境中于27°C下培養(yǎng)18天;在培養(yǎng)結束后分別向錐形瓶中加入10mL質量濃度為5%氯化鈣溶液和3mL失水山梨醇脂肪酸酯,放置在搖床上振蕩混合過夜,再向其中加入lmL質量濃度為10%對苯二酚溶液,繼續(xù)保溫轉化30h;取出轉化后黃岑毛狀根,并用去離子水沖洗 20min后,放入氣流粉碎機中粉碎,過60目標準篩,得黃岑根碎塊,將黃岑根碎塊移入超聲提取儀中,同時向其中加入黃岑根碎塊總體積3倍質量濃度為60%乙醇溶液,以300W功率超聲振蕩提取3h后,過0.4wii微孔濾膜,得純化提取液;最后將上述純化提取液裝入旋轉蒸發(fā)器中,旋蒸濃縮至其原體積的1/5后,向其加入0.lg熊果苷晶種,攪拌均勻后放入4°C冰水浴中靜置結晶過夜,過濾得析出的熊果苷晶體,將其放入真空干燥機中,在〇.〇5MPa的真空度和 60°C條件下干燥lh,即得熊果苷。
[0009]將本發(fā)明制得的熊果苷添加至祛斑霜原料中,添加量為祛斑霜原料總質量3.5%, 制得祛斑霜,該熊果苷生物利用度高達99.69%,可有效抑制體內酪氨酸酶的活性,阻止黑色素的生成,與傳統(tǒng)的生物轉化法相比熊果苷產(chǎn)量提高了 30.2%,生產(chǎn)周期縮短了 7天。
[0010]實例2首先按重量份數(shù)計,稱取93份硝酸鉀、9份磷酸二氫鉀、2份乙二胺四乙酸二鈉、0.2份硼酸、〇.2份甘氨酸、0.4份硫酸鋅、15份肌醇、45份水解乳蛋白、13份葡萄糖、53份蔗糖及850份蒸餾水,攪拌混合均勻,得自制黃岑根組織培養(yǎng)液;然后量取450mL上述自制黃岑組織培養(yǎng)液裝入錐形瓶中,再移入無菌箱中,向錐形瓶中接種5g鮮嫩的黃岑毛狀根,用黑布遮住無菌箱在黑暗環(huán)境中于28°C下培養(yǎng)20天;在培養(yǎng)結束后分別向錐形瓶中加入15mL質量濃度為5% 氯化鈣溶液和4mL失水山梨醇脂肪酸酯,放置在搖床上振蕩混合過夜,再向其中加入2mL質量濃度為10%對苯二酚溶液,繼續(xù)保溫轉化33h;取出轉化后黃岑毛狀根,并用去離子水沖洗 25min后,放入氣流粉碎機中粉碎,過60目標準篩,得黃岑根碎塊,將黃岑根碎塊移入超聲提取儀中,同時向其中加入黃岑根碎塊總體積4倍質量濃度為60%乙醇溶液,以350W功率超聲振蕩提取4h后,過0.5wii微孔濾膜,得純化提取液;最后將上述純化提取液裝入旋轉蒸發(fā)器中,旋蒸濃縮至其原體積的1/5后,向其加入0.2g熊果苷晶種,攪拌均勻后放入5°C冰水浴中靜置結晶過夜,過濾得析出的熊果苷晶體,將其放入真空干燥機中,在〇.〇6MPa的真空度和 65°C條件下干燥2h,即得熊果苷。
[0011]將本發(fā)明制得的熊果苷添加至祛斑霜原料中,添加量為祛斑霜原料總質量3.8%, 制得祛斑霜,該熊果苷生物利用度高達99.81%,可有效抑制體內酪氨酸酶的活性,阻止黑色素的生成,與傳統(tǒng)的生物轉化法相比熊果苷產(chǎn)量提高了 31.4%,生產(chǎn)周期縮短了 8天。
[0012]實例3首先按重量份數(shù)計,稱取95份硝酸鉀、9份磷酸二氫鉀、2份乙二胺四乙酸二鈉、0.3份硼酸、0.2份甘氨酸、0.5份硫酸鋅、20份肌醇、50份水解乳蛋白、15份葡萄糖、55份蔗糖及900份蒸餾水,攪拌混合均勻,得自制黃岑根組織培養(yǎng)液;然后量取500mL上述自制黃岑組織培養(yǎng)液裝入錐形瓶中,再移入無菌箱中,向錐形瓶中接種5g鮮嫩的黃岑毛狀根,用黑布遮住無菌箱在黑暗環(huán)境中于29 °C下培養(yǎng)22天;在培養(yǎng)結束后分別向錐形瓶中加入20mL質量濃度為5% 氯化鈣溶液和5mL失水山梨醇脂肪酸酯,放置在搖床上振蕩混合過夜,再向其中加入2mL質量濃度為10%對苯二酚溶液,繼續(xù)保溫轉化35h;取出轉化后黃岑毛狀根,并用去離子水沖洗 30min后,放入氣流粉碎機中粉碎,過60目標準篩,得黃岑根碎塊,將黃岑根碎塊移入超聲提取儀中,同時向其中加入黃岑根碎塊總體積3?5倍質量濃度為60%乙醇溶液,以400W功率超聲振蕩提取5h后,過0.5wii微孔濾膜,得純化提取液;最后將上述純化提取液裝入旋轉蒸發(fā)器中,旋蒸濃縮至其原體積的1/5后,向其加入0.3g熊果苷晶種,攪拌均勻后放入6°C冰水浴中靜置結晶過夜,過濾得析出的熊果苷晶體,將其放入真空干燥機中,在〇.〇7MPa的真空度和70°C條件下干燥2h,即得熊果苷。
[0013]將本發(fā)明制得的熊果苷添加至祛斑霜原料中,添加量為祛斑霜原料總質量4.0%, 制得祛斑霜,該熊果苷生物利用度高達99.93%,可有效抑制體內酪氨酸酶的活性,阻止黑色素的生成,與傳統(tǒng)的生物轉化法相比熊果苷產(chǎn)量提高了 32.5%,生產(chǎn)周期縮短了 9天。
【主權項】
1.一種利用黃岑根轉化合成熊果苷的方法,其特征在于具體制備步驟為:(1)按重量份數(shù)計,稱取90?95份硝酸鉀、8?9份磷酸二氫鉀、1?2份乙二胺四乙酸二 鈉、0.1?0.3份硼酸、0.1?0.2份甘氨酸、0.3?0.5份硫酸鋅、10?20份肌醇、40?50份水解 乳蛋白、10?15份葡萄糖、50?55份蔗糖及800?900份蒸餾水,攪拌混合均勻,得自制黃岑 根組織培養(yǎng)液;(2)量取400?500mL上述自制黃岑組織培養(yǎng)液裝入錐形瓶中,再移入無菌箱中,向錐形 瓶中接種4?5g鮮嫩的黃岑毛狀根,用黑布遮住無菌箱在黑暗環(huán)境中于27?29°C下培養(yǎng)18 ?22天;(3)培養(yǎng)結束后分別向錐形瓶中加入10?20mL質量濃度為5%氯化鈣溶液和3?5mL失水 山梨醇脂肪酸酯,放置在搖床上振蕩混合過夜,再向其中加入1?2mL質量濃度為10%對苯二 酚溶液,繼續(xù)保溫轉化30?35h;(4)取出轉化后黃岑毛狀根,并用去離子水沖洗20?30min后,放入氣流粉碎機中粉碎, 過60目標準篩,得黃岑根碎塊,將黃岑根碎塊移入超聲提取儀中,同時向其中加入黃岑根碎 塊總體積3?5倍質量濃度為60%乙醇溶液,以300?400W功率超聲振蕩提取3?5h后,過0.4 ?0.5mi微孔濾膜,得純化提取液;(5)將上述純化提取液裝入旋轉蒸發(fā)器中,旋蒸濃縮至其原體積的1/5后,向其加入0.1 ?〇.3g熊果苷晶種,攪拌均勻后放入4?6°C冰水浴中靜置結晶過夜,過濾得析出的熊果苷 晶體,將其放入真空干燥機中,在0.05?0.07MPa的真空度和60?70°C條件下干燥1?2h,即得熊果苷。
【文檔編號】C07H15/203GK106047789SQ201610469312
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月25日
【發(fā)明人】仇穎超, 盛海豐, 林茂平
【申請人】仇穎超
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