專利名稱:灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及灰樹花多糖提取物的測定方法,尤其涉及灰樹花深層液體發(fā)酵液多糖提取物中非活性成分淀粉含量的定量測定方法。
本發(fā)明的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,由以下步驟組成1)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待測多糖樣品,分別稱0.5~2克于6個離心杯中,分別加入30ml乙醚,充分振蕩5~15分鐘,以4000~5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘,棄去上清液,再加入30ml乙醚,如此重復(fù)離心3次;2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入50~60℃的80%乙醇30ml,充分振蕩5~15分鐘,以4000~5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘,棄去上清液,如此重復(fù)離心3次;然后再向離心后的杯中加入40~50℃蒸餾水30ml,在40~50℃恒溫水浴中振蕩60分鐘,以4000~5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘,棄去上清液,再加入30ml蒸餾水,如此重復(fù)離心3次;3)酶法分解淀粉向步驟2)棄去上清液后的離心杯中加入5ml蒸餾水,濕潤并攪拌分離出的樣品,再加入80~90℃蒸餾水40ml,攪勻后,置沸水浴中處理50~60分鐘使淀粉糊化;之后冷卻至50℃,加入1%的糖化酶液10ml,并立即加入pH4~6的磷酸鹽緩沖液25ml,再加入甲苯5~7滴,混勻,封口,置于45~48℃條件下保溫20~24小時進行淀粉酶解;4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測,若顯藍色、紅色或紫色,即為淀粉酶解不完全,應(yīng)再重復(fù)步驟3)的酶法分解淀粉,直至加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止,即為淀粉酶解完全;
5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后,用6molL-1NaOH中和至中性,然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(0Ac)2溶液,直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止;再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液,直至不產(chǎn)生白色沉淀為止;以4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5-10分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移入容量瓶,調(diào)節(jié)pH為9.1~9.6,以測定需求量定容;6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品,按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法,測定樣品中可溶性糖的含量。
其中,上述步驟1)或2)所述的振蕩時間是8~12分鐘。
其中,上述步驟2)所述80%乙醇的溫度是55~58℃。
其中,上述步驟2)所述加入的蒸餾水和恒溫水浴的溫度均為45~50℃。
其中,上述步驟3)所述磷酸鹽緩沖液的pH為4.8~5.6。
其中,上述步驟3)所述進行淀粉酶解的溫度是45℃,時間是20小時。
其中,上述步驟5)所述處理后的淀粉酶解液pH為9.3~9.5。
其中,上述步驟6)所述的食品中還原糖的測定方法包括如下步驟①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積,同時平行操作三份,取其平均值,計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg);②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以先快后慢的速度,從滴定管中滴加樣品溶液,并保持溶液沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以每兩秒1滴的速度滴定,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積;③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液,使在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定,直至藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積,同法平行操作三份,得出平均消耗體積。
采用本發(fā)明進行灰樹花多糖產(chǎn)品中淀粉含量的測定,具有可操作性強、測定結(jié)果穩(wěn)定可靠、測定結(jié)果的變異系數(shù)小、誤差小、重現(xiàn)性高等優(yōu)點。實驗顯示,根據(jù)樣品中淀粉含量不同,變異系數(shù)一般在5%~10%范圍內(nèi)??蓾M足常規(guī)實驗室對分析測試的要求以及相關(guān)企業(yè)對產(chǎn)品質(zhì)量的控制要求。
下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的說明。
2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入57℃的80%乙醇30ml,充分振蕩15分鐘,以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,棄去上清液,如此重復(fù)離心3次;然后再向棄去上清液后的離心杯中加入50℃蒸餾水30ml,在50℃恒溫水浴中振蕩60分鐘,以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,棄去上清液,再加入30ml蒸餾水,如此重復(fù)離心3次;3)酶法分解淀粉向步驟2)棄去上清液后的離心杯中加入5ml蒸餾水,濕潤并攪拌分離出的樣品,再加入90℃蒸餾水40ml,攪勻后,置沸水浴中處理55分鐘使淀粉糊化;之后冷卻至50℃,加入1%的糖化酶液10ml,并立即加入pH 5.2的磷酸鹽緩沖液25ml,再加入甲苯5滴,混勻,封口,置于45℃條件下保溫20小時進行淀粉酶解;4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測,至結(jié)果為加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止,即為淀粉酶解完全;5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后,用6molL-1NaOH中和至中性,然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液,直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止;再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液,直至不產(chǎn)生白色沉淀為止;以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移入250ml容量瓶,調(diào)節(jié)pH為9.3,定容,設(shè)為V2;6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品,按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法,測定樣品中可溶性糖的含量。
①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積,同時平行操作三份,取其平均值V0,計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg);②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以先快后慢的速度,從滴定管中滴加樣品溶液,并保持溶液沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以每兩秒1滴的速度滴定,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積;③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液,使在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定,直至藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積,同法平行操作三份,得出平均消耗體積V1。
同時,以同方法做試劑空白試驗。
結(jié)果計算淀粉%=V0*C/(1000mV1)*0.9*100%(式中淀粉含量以葡萄糖計)灰樹花活性多糖中淀粉含量的測定實施例分析結(jié)果見附表1。
其中m1——10ml堿性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5ml)相當于還原糖(以葡萄糖計)的質(zhì)量,mg;m——樣品質(zhì)量,g;V0——10ml堿性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5ml)消耗的標準葡萄糖溶液體積,ml;V2——定容體積,mlV1——測定樣品時平均消耗樣品溶液體積,ml。
實施例21)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待測多糖樣品(編號為2號),稱0.943克、1.0392克、0.85克、0.9977克、0.9023克、0.9383克分別放于6個離心杯中,分別加入30ml乙醚,充分振蕩15分鐘,以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,棄去上清液,再加入30ml乙醚,如此重復(fù)離心3次;2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入50℃的80%乙醇30ml,充分振蕩10分鐘,以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,棄去上清液,如此重復(fù)離心3次;然后再向棄去上清液后的離心杯中加入40℃蒸餾水30ml,在45℃恒溫水浴中振蕩60分鐘,以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,棄去上清液,再加入30ml蒸餾水,如此重復(fù)離心3次;3)酶法分解淀粉;向步驟2)棄去上清液后的離心杯中加入5ml蒸餾水,濕潤并攪拌分離出的樣品,再加入80℃蒸餾水40ml,攪勻后,置沸水浴中處理60分鐘使淀粉糊化;之后冷卻至50℃,加入1%的糖化酶液10ml,并立即加入pH 4.8的磷酸鹽緩沖液25ml,再加入甲苯7滴,混勻,封口,置于48℃條件下保溫24小時進行淀粉酶解;4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測,至結(jié)果為加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止,即為淀粉酶解完全;5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后,用6molL-1NaOH中和至中性,然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液,直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止;再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液,直至不產(chǎn)生白色沉淀為止;以4800轉(zhuǎn)/分鐘離心7分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移入250ml容量瓶,調(diào)節(jié)pH為9.5,定容,設(shè)為V2;6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品,按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法,測定樣品中可溶性糖的含量。
①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積,同時平行操作三份,取其平均值V0,計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg)②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以先快后慢的速度,從滴定管中滴加樣品溶液,并保持溶液沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以每兩秒1滴的速度滴定,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積;③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液,使在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定,直至藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積,同法平行操作三份,得出平均消耗體積V1。
同時,以同方法做試劑空白試驗。
結(jié)果計算淀粉%=V0*C/(1000mV1)*0.9*100%(式中淀粉含量以葡萄糖計)灰樹花活性多糖中淀粉含量的測定實施例分析結(jié)果見附表2。
權(quán)利要求
1.一種灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,由以下步驟組成1)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待測多糖樣品,分別稱0.5~2克于6個離心杯中,分別加入30ml乙醚,充分振蕩5~15分鐘,以4000~5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘,棄去上清液,再加入30ml乙醚,如此重復(fù)離心3次;2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入50~60℃的80%乙醇30ml,充分振蕩5~15分鐘,以4000~5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘,棄去上清液,如此重復(fù)離心3次;然后再向棄去上清液后的離心杯中加入40~50℃蒸餾水30ml,在40~50℃恒溫水浴中振蕩60分鐘,以4000~5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘,棄去上清液,再加入30ml蒸餾水,如此重復(fù)離心3次;3)酶法分解淀粉向步驟2)離心棄去上清液后的杯中加入5ml蒸餾水,濕潤并攪拌分離出的樣品,再加入80~90℃蒸餾水40ml,攪勻后,置沸水浴中處理50~60分鐘使淀粉糊化;之后冷卻至50℃,加入1%的糖化酶液10ml,并立即加入pH4~6的磷酸鹽緩沖液25ml,再加入甲苯5~7滴,混勻,封口,置于45~48℃條件下保溫20~24小時進行淀粉酶解;4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測,若顯藍色、紅色或紫色,即為淀粉酶解不完全,應(yīng)再重復(fù)步驟3)的酶法分解淀粉,直至加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止,即為淀粉酶解完全;5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后,用6molL-1NaOH中和至中性,然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液,直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止;再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液,直至不產(chǎn)生白包沉淀為止;以4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5-10分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移入容量瓶,調(diào)節(jié)pH為9.1~9.6,以測定需求量定容;6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品,按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法,測定樣品中可溶性糖的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟1)或2)所述的振蕩時間是8~12分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟2)所述80%乙醇的溫度是55~58℃。
4.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟2)所述加入的蒸餾水和恒溫水浴的溫度均為45~50℃。
5.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟3)所述磷酸鹽緩沖液的pH為4.8~5.6。
6.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟3)所述進行淀粉酶解的溫度是45℃,時間是20小時。
7.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟5)所述處理后的淀粉酶解液pH為9.3~9.5。
8.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其特征在于,步驟6)所述的食品中還原糖的測定方法包括如下步驟①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積,同時平行操作三份,取其平均值,計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg);②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸以先快后慢的速度,從滴定管中滴加樣品溶液,并保持溶液沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以每兩秒1滴的速度滴定,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積;③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,加水10ml,加入玻璃珠2粒,從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液,使在2min內(nèi)加熱至沸,趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定,直至藍色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積,同法平行操作三份,得出平均消耗體積。
全文摘要
本發(fā)明公開一種灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法,其方法包括脂溶性成分除去,可溶性糖類干擾物質(zhì)除去,酶法分解淀粉,淀粉酶解檢測,淀粉酶解液處理,斐林法測定還原糖含量等步驟。本發(fā)明的方法具有可操作性強、測定結(jié)果穩(wěn)定可靠、測定結(jié)果的變異系數(shù)小、誤差小、重現(xiàn)性高等優(yōu)點。
文檔編號G01N31/16GK1474183SQ0313896
公開日2004年2月11日 申請日期2003年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月1日
發(fā)明者隋方功, 宋愛榮, 張玉娜, 呂銀燕 申請人:萊陽農(nóng)學(xué)院